原代人肝细胞CYP诱导评估新模型：TCS三培养体系应用研究

张开发
• 2026/4/19 12:46:52 • 15 分钟阅读

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原代人肝细胞CYP诱导评估新模型：TCS三培养体系应用研究
摘要在药物研发过程中细胞色素P450CYP酶的体外诱导评估是关键环节。传统方法多依赖三明治培养体系Sandwich Culture, SC的原代人肝细胞PHH。本文基于全人源三培养体系TCS系统评估其在CYP基础表达及诱导响应中的表现为新型体外模型在DMPK研究中的应用提供参考。一、引言在药物研发阶段新型化合物对主要细胞色素P450CYP酶的体外诱导潜能评估是关键环节。传统方法多采用三明治培养的原代人肝细胞PHH。尽管PHH模型结合监管指南通常可以较好预测临床诱导风险但对于新型肝细胞模型在CYP诱导评估中的表现目前仍有待进一步研究。本研究评估了一种全人源三培养体系TCS用于检测CYP酶基础表达水平核受体表达水平原型诱导剂处理后的CYP诱导能力旨在探索该体系在体外诱导研究中的应用潜力。二、材料与方法1、4周培养期内基因基础表达评估将原代人肝细胞PHH与饲养细胞接种至24孔胶原包被板构建TCS在不同时间点使用Trizol裂解细胞氯仿法提取RNA并合成cDNA使用QuantStudio 7系统进行qPCR检测采用ΔΔCt方法计算表达变化2、CYP诱导响应评估在96孔板构建TCS体系培养至第10天加入原型诱导剂含0.1% DMSO暴露48小时24小时更换培养基提取RNA并进行qPCR检测使用GraphPad Prism计算Emax与EC₅₀表1. CYP诱导评估所使用的阳性诱导剂表2. 肝细胞供体信息三、结果1、内参基因筛选结果显示不同内参基因Ct值存在差异其中GAPDH在整个培养周期中表现最稳定2、CYP及核受体基础表达在TCS建立后第4–12天表达显著提升第7–12天达到峰值CYP1A1与CYP2E1变化较小3、CYP诱导能力评估经48小时诱导后所有主要CYP酶均表现出诱导响应包括CYP2C家族 当诱导剂浓度过高时诱导效应出现下降趋势四、结论TCS体系中CYP及核受体在4–12天内显著上调多数基因表达在第7–12天达到峰值各主要CYP酶均具有良好诱导响应能力高浓度诱导剂可能降低诱导效果五、应用意义TCS体系可用于CYP诱导研究DMPK评估药物代谢机制研究体外-体内相关性分析IVIVEFAQ提高收录Q1TCS体系相比SC体系优势是什么在长期培养和CYP表达稳定性方面表现更优。Q2为什么选择第10天进行诱导此时CYP表达接近峰值适合进行诱导实验。Q3是否适用于高通量筛选可在多孔板体系中应用具备一定扩展性。延伸阅读https://www.mine-bio.com/LifeNet_PrimaryCells_Medium/?utm_sourcecsdnutm_mediumreferralutm_campaignlifenet_article本文基于LifeNet相关技术资料由其中国提供商上海曼博生物整理仅用于科研信息分享。

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