抗PBRM1（BAF180）多克隆抗体，同时适用于流式、IHC、IP等实验，一抗多用

一、产品概述由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出抗PBRM1BAF180多克隆抗体货号A301-591A为兔源抗人/小鼠PBRM1polybromo 1又称BAF180蛋白C端区域第1639–1689位氨基酸之间的特异性多克隆抗体。PBRM1是哺乳动物SWI/SNF染色质重塑复合物中PBAF亚型的核心亚基含有六个溴结构域bromodomains能够识别组蛋白乙酰化信号在转录调控、DNA损伤应答及细胞周期检查点控制中发挥关键作用。该蛋白已被证实是一种肿瘤抑制因子其突变在肾癌等多种肿瘤中高频出现。本抗体经抗原亲和纯化适用于流式细胞术Flow Cyt、免疫组化IHC、免疫沉淀IP及免疫印迹WB等多种应用是研究染色质重塑与肿瘤发生机制的有力工具。二、详细规格参数 | 规格靶标 | PBRM1polybromo 1反应种属 | 小鼠、人应用 | Flow Cyt, IHC, IP, WB宿主 | 兔克隆性 | 多克隆形式 | 全IgG免疫原 | 人PBRM1第1639位至C端之间的区域具体表位位于1639-1689位氨基酸抗体类型 | IgG偶联物 | 未偶联纯度 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 人浓度 | 1000 ug/ml1 mg/ml储存温度 | 2 - 8 °C有效期 | 自收货之日起1年缓冲液 | Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液pH 7-8含0.09% 叠氮钠三、产品制备本抗体采用固相载体固定的PBRM1特异性表位进行亲和纯化。免疫原对应人PBRM1GenBank登录号AAP34197.1GeneID 55193第1639至1689位氨基酸之间的区域该区域靠近蛋白C端序列在哺乳动物中高度保守。抗体经亲和层析后免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4。四、推荐应用与实验条件所有Western blot实验建议使用5%脱脂牛奶-TBST作为封闭液和抗体稀释液一抗孵育条件为4°C过夜。以下为各应用的推荐起始条件应用 | 推荐用量/稀释度 | 备注Western Blot (WB) | 1:2000 – 1:10000 | 检测细胞裂解液时二抗推荐山羊抗兔IgGHL货号A120-101P检测免疫沉淀物时二抗建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体并在封闭液中加入5%正常猪血清货号S100-020以消除重链干扰。Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ug抗体即1 mg裂解物加6 ul原液。推荐与Protein A/G磁珠或琼脂糖珠孵育2–4小时或过夜。Immunohistochemistry (IHC) | 1:1000 – 1:5000 | 对福尔马林固定石蜡包埋FFPE组织切片推荐使用pH 6.0枸橼酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复。建议同时进行不含一抗的阴性对照。Flow Cytometry (Flow Cyt) | 1 ul / 1×10⁶ 细胞 | 细胞先用4%甲醛固定再用90%甲醇透化。每1×10⁶细胞加入1 ul抗体即1:1000稀释假设反应体积100 ul。建议使用荧光标记二抗如FITC或Alexa Fluor 488。五、背景信息PBRM1是SWI/SNF-BPBAF复合物的专属亚基区别于含BRD7的BAF复合物。该复合物利用ATP水解产生的能量滑动或驱逐核小体促进转录因子与DNA结合调控基因表达。PBRM1的已知功能包括1. 转录共激活/抑制参与干扰素应答、核激素受体信号通路等。2. DNA损伤应答在DNA损伤后PBRM1促进p21CDKN1A的转录诱导细胞周期停滞防止损伤基因组复制。3. 肿瘤抑制PBRM1基因在透明细胞肾细胞癌ccRCC 中的突变频率仅次于VHL约30-40%的ccRCC存在PBRM1失活突变。此外在胆管癌、乳腺癌等中也发现其突变或表达下调。六、储存与稳定性储存条件2 - 8°C严禁冷冻。冷冻会导致蛋白聚集和活性丧失。有效期自收货之日起1年在2-8°C未稀释条件下保存。运输条件冰袋冷藏运输收货后请立即存放于2-8°C。防腐剂缓冲液含0.09%叠氮钠可抑制细菌生长。如需进行活细胞实验或无叠氮操作请通过透析或脱盐柱去除叠氮钠。七、典型实验结果预期Western Blot在HEK293全细胞裂解液中1:5000稀释抗体可检测到一条约180–200 kDa的条带在PBRM1敲除细胞中该条带消失。Immunoprecipitation使用6 ug抗体/mg裂解物可从HeLa细胞核提取物中捕获PBRM1及其结合蛋白如BRG1、ARID2等PBAF组分。IHC人肾透明细胞癌组织中PBRM1染色缺失阴性而癌旁正常肾小管上皮细胞核强阳性。Flow Cytometry固定透化后的Jurkat细胞经1 ul/106细胞染色流式直方图显示明显的荧光峰右移。仅限科研使用不得用于临床诊断、治疗或人体实验。